荧光素酶报告基因原理内参（荧光素酶报告基因原理）

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1、（1） 用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。

2、（2）设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段，将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒（pGL3-basic）中。

3、（3）筛选阳性克隆，测序。

4、扩增克隆并提纯质粒备用。

5、（4） 扩增转录因子质粒，提纯备用。

6、同时准备相应的空载质粒对照，提纯备用。

7、（5） 培养293（或其它目的细胞），并接种于24孔板中，生长10-24小时（80%汇合度）。

8、（6） 将报告基因质粒与转录因子表达质粒共转染细胞。

9、（7）提取蛋白并用于荧光素酶检测。

10、（8） 加入底物，测定荧光素酶的活性。

11、（9） 计算相对荧光强度，并与空载对照比较。

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