牛血清白蛋白的作用（牛血清白蛋白）

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1、 蛋白质浓度的测定

2、 按照50: 1配置BCA工作液。10ulC溶液(蛋白质标准)90ulPBS溶液稀释成0.5mg/ml蛋白质标准溶液。

3、 然后在96孔板的第1 ~ 8个标准孔中分别加入0、1、2、4、8、12、16和20ul的蛋白质标准溶液，在其他样品孔中加入10ul的待测样品。加入PBS分别固定体积至20ul。向每个孔中加入200微升BCA工作溶液，

4、 在室温下放置2小时。酶联免疫吸附法测定蛋白浓度：测定A562，根据标准曲线计算蛋白浓度。

5、 SDS-PAGE电泳

6、 1制胶：

7、 按比例配制分离凝胶，缓慢摇动溶液使活化剂混合均匀，将凝胶溶液轻轻注入两层玻璃电极中，然后在液面小心注入一层水，防止氧气进入凝胶溶液，静置40min。如前所述按比例配制浓缩胶，

8、 但不要过于剧烈地混合溶液，以免引入过多的氧气。吸收不连续体系下层分离胶中的水分，连续平稳注入凝胶溶液，然后小心插入梳子并注意不要在齿尖留下气泡，静置60min以上，确保完全聚合。

9、 2.预电泳：将聚合好的凝胶放入电泳槽中蒸熟，小心取下梳子，加入电泳缓冲液，在10-20V的低电压下预电泳20-30分钟。(目的是去除凝胶中的杂质，

10、 疏通凝胶的孔径，保证电泳时电泳顺畅)。

11、 样品制备：先计算样品体积，然后按样品：样品缓冲液=4: 1的比例加入样品缓冲液，混匀，沸水中煮沸10分钟，冷冻5分钟。

12、 4样品添加：

13、 预电泳后，依次加入标记物和待分析的样品。(加样时间尽量短，避免样品扩散，可在无样品的孔中加入等量的样品缓冲液，避免边缘效应。每个通道5ul。

14、 5电扫描：

15、 加样后，在80V的恒压下进行电泳，直到溴酚蓝染料前沿到达两块凝胶的交界处(一般约20分钟)，然后改为100V的恒压电泳，直到溴酚蓝染料前沿下降到凝胶末端时(一般约1小时20分钟)停止电泳。

16、 膜的密封

17、 用TBST溶液清洗印迹膜10分钟2次。放入5%BSA(abs49001012)密封液中，摇床，70 rpm，室温密封1小时30分钟。

18、 蛋白质的样品制备

19、 取心肌组织50mg，待组织块自行溶解时，用滤纸吸去表面水分，将组织块放入玻璃匀浆器的球形部分，用组织剪尽可能剪下，将剪下的心肌组织放入玻璃匀浆器的棒状部分。

20、 按照1mlRIPA 10ulPMSF/100mg心肌组织的比例加入RIPA和PMSF(先RIPA后PMSF)，将玻璃匀浆器插入冰中，匀浆约30分钟。

21、 将心肌组织匀浆转移至离心管中，412000g离心5分钟，收集上清液(如有粘稠物质，进一步超声处理)，将样品包装后-20保存备用。

本文到此结束，希望对大家有所帮助。

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